Сканирующий лазерный конфокальный микроскоп Leica TCS SP5 MP

Назначение

Система Leica TCS SP5 MP предназначена для проведения исследований с использованием лазерной конфокальной сканирующей микроскопии и мультифотонной микроскопии, позволяющих визуализировать с высоким разрешением структуру и динамические процессы на поверхности и в глубине образцов.

Основные возможности

Установленная в ЦКП ИЭФБ РАН система разработана на базе инвертированного микроскопа Leica DMI6000, позволяющего получать высококачественные изображения. Особенностью данной системы является то, что она совмещает в себе обычный лазерный сканер для получения максимального разрешения изображений и резонансный сканер – для максимальной скорости сканирования, что обеспечивает быструю визуализацию при высокой разрешающей способности и позволяет проводить измерения динамических процессов. Наличие мультифотонного режима, использующего импульсный инфракрасный лазер, излучение которого меньше рассеивается в биологических тканях, дает возможность исследовать объекты в глубину до 400 мкм. Кроме того, в мультифотонном режиме работы возбуждение флуоресценции происходит только в фокальной плоскости, что уменьшает обесцвечивание флуорофоров в зонах выше и ниже области интереса, а также снижает фототоксичность, что идеально подходит для исследования живых клеток, толстых образцов и образцов с высокочувствительным окружением.

Программное обеспечение позволяет создавать серии изображений с последующей 3D реконструкцией изучаемых объектов и их анимацией.

Прибор имеет широкий диапазон применений в различных областях биологии и медицины. Основные возможности включают:

  • Исследование живых клеток и тканей, а также фиксированных препаратов.
  • Изучение распределения молекул, меченых флуорофорами по нескольким параметрам (оси x, y, z, время, длина волны возбуждения и испускания, время жизни флуоресценции (FLIM) и анизотропия флуоресценции).
  • Регистрацию динамических процессов в клетках с высоким временным разрешением за счет использования скоростного резонансного сканнера.
  • Определение относительной концентрации исследуемых веществ, скорости диффузии, полимеризации, мембранного потенциала, кинетики взаимодействия молекул методами флуоресцентной корреляционной/кросс-корреляционной спектроскопии (FSC, FCCS), изменений конформации молекул, резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET) в живых клетках с использованием флуориметрических флуорохромов.

Методы наблюдения в проходящем свете:

  • Светлое поле
  • Поляризация
  • Дифференциально-интерференционный контраст

Ключевые особенности

  • Возможность визуализации на большой глубине за счет использования мультифотонного режима.
  • Минимальное повреждение образца (пониженная фототоксичность).
  • Регистрация в реальном времени.
  • Получение изображений высокого разрешения.
  • Широкие возможности расширения и интеграции для выполнения комплексных исследований.

Технические характеристики и установленные аксессуары

Параметр

Значение

Тип микроскопа

Инвертированный Leica DMI6000CS с моторизированным XY-столиком и модулем автофокусировки по Z-оси. Перемещение препарата по осям X/Y 120/120 мм с точностью 3 мкм, по оси Z – 1.5 мм, шаг – 3 нм.

Источник света

Галогеновая лампа мощностью 150 Вт, флуоресцентный осветитель с гибким световодом и регулировкой яркости, замена лампы без необходимости юстировки.

Источники лазерного излучения, длина (длины) волны, максимальная мощность выходная/ в фокальной плоскости

Ar 458/476/488/514 нм, <200/<30

Ar 458/476/488/514 нм, <500/<125

HeNe, 543 нм, <1.5/ <0.5

HeNe, 633 нм, <15/ <4

Для флуорохромов с длиной волны возбуждения менее 458 нм есть возможность использования мультифотонного лазера (630-1080 нм) для реализации двухфотонного возбуждения.

Объективы

10х (сухой), 20х и 40х – (водная иммерсия), 63х и 100х – (масляная иммерсия)

Тип сканера, характеристики

Тандемный, включающий стандартный (для высокого разрешения) и резонансный (для высокой скорости) сканеры.

Стандартный сканер:

Максимальное разрешение – 8196 x 8196 пикселей.

Поле зрения – 22 мм.

Диапазон скоростей сканирования линии – 1-2800 Гц. Частота обновления кадра: 512х512 пикселей – 5 Гц, 512х16 пикселей – 50 Гц.

Диапазон изменения масштаба изображения – 1.0-64x.

Поворот поля сканирования – 200° в обоих направлениях.

Резонансный сканер:

Максимальное разрешение –1024x 1024 пикселей.

Поле зрения – 15 мм.

Диапазон скоростей сканирования линии – 8-16 кГц.

Частота обновления кадра: 512х512 пикселей – 28 Гц, 512х16 пикселей – 290 Гц.

Диапазон изменения масштаба изображения – 1.7-64x.

Поворот поля сканирования – 200° в обоих направлениях.

Система светоделителя сканера: позволяет использовать для возбуждения флуоресценции любое сочетание лазерных линий с селективностью 2 нм. Одновременно отделяет до 8 линий лазеров.

Режимы сканирования

xt, xy, xyt, xyλ, xz, xzλ, xyz, xyzλ, xzt, xyzt, xytz

Внутренняя конфокальная детекция

Внутренние детекторы сканера (конфокальные каналы): 3 шт,, регистрация флуоресценции в диапазоне от 400-800 нм, с независимой регулировкой. Установка ширины полосы чувствительности детекторов с шагом 1 нм и разрешением 5 нм.

АЦП: 12 или 18 бит.

Внешняя конфокальная детекция

Нет.

Неконфокальная детекция

Детектор проходящего света (TLD), 2 внешних неконфокальных детектора отраженного света (недесканируемые детекторы, (NDD-RLD)) со следующим набором светофильтров:

FITC-TRITC (SP 680, BS 560, BP 525/50, BP 585/40)

DAPI-TRITC (SP 680, BS 495, BP 460/50, BP 525/50)

Установленные цифровые фотокамеры

Leica DFC300 FX – цветная  CCD камера с высокочувствительным RGB фильтром Байера. Разрешение – 1.4 Мпикс., максимальная скорость съемки 60 кадров/c для быстро обесцвечивающихся флуоресцентных образцов. Глубина цвета – 36 Бит. Время выдержки в диапазоне 5 мкс – 10 мин.

Программное обеспечение

LAS AF

Дополнительно установленные аксессуары

Камера для культур клеток и срезов на столе микроскопа в условиях близких к физиологическим в течении экспериментов продолжительностью в несколько часов.

Общая и локальная система перфузии для подачи/смены растворов

 Ссылка на сайте производителя:

http://www.leica-microsystems.com/products/confocal-microscopes/details/product/leica-tcs-sp5-mp/

https://www.leica-microsystems.com/products/confocal-microscopes/details/product/leica-tcs-sp5-mp/downloads/