
Сканирующий лазерный конфокальный микроскоп Leica TCS SP5 MP
Назначение
Система Leica TCS SP5 MP предназначена для проведения исследований с использованием лазерной конфокальной сканирующей микроскопии и мультифотонной микроскопии, позволяющих визуализировать с высоким разрешением структуру и динамические процессы на поверхности и в глубине образцов.
Основные возможности
Установленная в ЦКП ИЭФБ РАН система разработана на базе инвертированного микроскопа Leica DMI6000, позволяющего получать высококачественные изображения. Особенностью данной системы является то, что она совмещает в себе обычный лазерный сканер для получения максимального разрешения изображений и резонансный сканер – для максимальной скорости сканирования, что обеспечивает быструю визуализацию при высокой разрешающей способности и позволяет проводить измерения динамических процессов. Наличие мультифотонного режима, использующего импульсный инфракрасный лазер, излучение которого меньше рассеивается в биологических тканях, дает возможность исследовать объекты в глубину до 400 мкм. Кроме того, в мультифотонном режиме работы возбуждение флуоресценции происходит только в фокальной плоскости, что уменьшает обесцвечивание флуорофоров в зонах выше и ниже области интереса, а также снижает фототоксичность, что идеально подходит для исследования живых клеток, толстых образцов и образцов с высокочувствительным окружением.
Программное обеспечение позволяет создавать серии изображений с последующей 3D реконструкцией изучаемых объектов и их анимацией.
Прибор имеет широкий диапазон применений в различных областях биологии и медицины. Основные возможности включают:
- Исследование живых клеток и тканей, а также фиксированных препаратов.
- Изучение распределения молекул, меченых флуорофорами по нескольким параметрам (оси x, y, z, время, длина волны возбуждения и испускания, время жизни флуоресценции (FLIM) и анизотропия флуоресценции).
- Регистрацию динамических процессов в клетках с высоким временным разрешением за счет использования скоростного резонансного сканнера.
- Определение относительной концентрации исследуемых веществ, скорости диффузии, полимеризации, мембранного потенциала, кинетики взаимодействия молекул методами флуоресцентной корреляционной/кросс-корреляционной спектроскопии (FSC, FCCS), изменений конформации молекул, резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET) в живых клетках с использованием флуориметрических флуорохромов.
Методы наблюдения в проходящем свете:
- Светлое поле
- Поляризация
- Дифференциально-интерференционный контраст
Ключевые особенности
- Возможность визуализации на большой глубине за счет использования мультифотонного режима.
- Минимальное повреждение образца (пониженная фототоксичность).
- Регистрация в реальном времени.
- Получение изображений высокого разрешения.
- Широкие возможности расширения и интеграции для выполнения комплексных исследований.
Технические характеристики и установленные аксессуары
Параметр | Значение |
Тип микроскопа | Инвертированный Leica DMI6000CS с моторизированным XY-столиком и модулем автофокусировки по Z-оси. Перемещение препарата по осям X/Y 120/120 мм с точностью 3 мкм, по оси Z – 1.5 мм, шаг – 3 нм. |
Источник света | Галогеновая лампа мощностью 150 Вт, флуоресцентный осветитель с гибким световодом и регулировкой яркости, замена лампы без необходимости юстировки. |
Источники лазерного излучения, длина (длины) волны, максимальная мощность выходная/ в фокальной плоскости | Ar 458/476/488/514 нм, <200/<30 Ar 458/476/488/514 нм, <500/<125 HeNe, 543 нм, <1.5/ <0.5 HeNe, 633 нм, <15/ <4 Для флуорохромов с длиной волны возбуждения менее 458 нм есть возможность использования мультифотонного лазера (630-1080 нм) для реализации двухфотонного возбуждения. |
Объективы | 10х (сухой), 20х и 40х – (водная иммерсия), 63х и 100х – (масляная иммерсия) |
Тип сканера, характеристики | Тандемный, включающий стандартный (для высокого разрешения) и резонансный (для высокой скорости) сканеры. Стандартный сканер: Максимальное разрешение – 8196 x 8196 пикселей. Поле зрения – 22 мм. Диапазон скоростей сканирования линии – 1-2800 Гц. Частота обновления кадра: 512х512 пикселей – 5 Гц, 512х16 пикселей – 50 Гц. Диапазон изменения масштаба изображения – 1.0-64x. Поворот поля сканирования – 200° в обоих направлениях. Резонансный сканер: Максимальное разрешение –1024x 1024 пикселей. Поле зрения – 15 мм. Диапазон скоростей сканирования линии – 8-16 кГц. Частота обновления кадра: 512х512 пикселей – 28 Гц, 512х16 пикселей – 290 Гц. Диапазон изменения масштаба изображения – 1.7-64x. Поворот поля сканирования – 200° в обоих направлениях. Система светоделителя сканера: позволяет использовать для возбуждения флуоресценции любое сочетание лазерных линий с селективностью 2 нм. Одновременно отделяет до 8 линий лазеров. |
Режимы сканирования | xt, xy, xyt, xyλ, xz, xzλ, xyz, xyzλ, xzt, xyzt, xytz |
Внутренняя конфокальная детекция | Внутренние детекторы сканера (конфокальные каналы): 3 шт,, регистрация флуоресценции в диапазоне от 400-800 нм, с независимой регулировкой. Установка ширины полосы чувствительности детекторов с шагом 1 нм и разрешением 5 нм. АЦП: 12 или 18 бит. |
Внешняя конфокальная детекция | Нет. |
Неконфокальная детекция | Детектор проходящего света (TLD), 2 внешних неконфокальных детектора отраженного света (недесканируемые детекторы, (NDD-RLD)) со следующим набором светофильтров: FITC-TRITC (SP 680, BS 560, BP 525/50, BP 585/40) DAPI-TRITC (SP 680, BS 495, BP 460/50, BP 525/50) |
Установленные цифровые фотокамеры | Leica DFC300 FX – цветная CCD камера с высокочувствительным RGB фильтром Байера. Разрешение – 1.4 Мпикс., максимальная скорость съемки 60 кадров/c для быстро обесцвечивающихся флуоресцентных образцов. Глубина цвета – 36 Бит. Время выдержки в диапазоне 5 мкс – 10 мин. |
Программное обеспечение | LAS AF |
Дополнительно установленные аксессуары | Камера для культур клеток и срезов на столе микроскопа в условиях близких к физиологическим в течении экспериментов продолжительностью в несколько часов. Общая и локальная система перфузии для подачи/смены растворов |
Ссылка на сайте производителя:
http://www.leica-microsystems.com/products/confocal-microscopes/details/product/leica-tcs-sp5-mp/